Stawanie się komuną Schizophyllum: Stwórz sterylną kulturę ze znalezionych grzybów: 3 kroki (ze zdjęciami)

2024 Autor: John Day | [email protected]. Ostatnio zmodyfikowany: 2024-01-30 11:32

Ta instrukcja koncentruje się na wyjaśnieniu, jak stworzyć sterylną kulturę grzyba Schizophyllum Commune (nazwa zwyczajowa grzyba Split Gill) na szalce Petriego przy użyciu znalezionych grzybów. Stwierdzono, że Schizophyllum Commune ma ponad 28 000 płci, można je znaleźć na wszystkich kontynentach z wyjątkiem Antarktydy i ma zdolność (podobnie jak inne „grzyby białej i brunatnej zgnilizny”) do degradacji zanieczyszczeń zaburzających gospodarkę hormonalną (tworzywa sztuczne, hormony naśladujące przemysłowe produkty petrochemiczne, takie jak nawóz Atrazine, plastyfikator Bisfenol-A lub syntetyczny hormon dietylostilbestrol).

Omówię techniki identyfikacji dzikich grzybów, jak zrobić szalkę Petriego z agarem odżywczym i jak wykorzystać znalezione grzyby do wyhodowania sterylnej wyizolowanej kultury na szalce Petriego. Inni instruktorzy z tej serii omawiają techniki, takie jak genetyczna identyfikacja grzybów, proste testy enzymatyczne do testowania zdolności grzybów do rozkładania plastiku i zanieczyszczeń naśladujących hormony oraz jak zrobić ser z S. Commune.

Ten projekt powstał dzięki współpracy Mary Maggic, Pauli Pin i mnie podczas rezydencji w HANGAR w Barcelonie, Hiszpania, jesienią 2018. Aby uzyskać więcej informacji o projekcie, przeczytaj ~~ lub pomiń wszystkie Bla Bla i przejdź od razu do Step 1 do samouczka:)

Obrazy pochodzą z Fanzine'u Schizophyllum Commune ~ pliki można pobrać za darmo tutaj

Podczas rezydencji naszymi trzema głównymi celami było:

1 ~ Zbadaj i przeanalizuj literaturę naukową na temat Schizophyllum Commune i jej różnych interakcji z hormonami i zanieczyszczeniami petrochemicznymi zaburzającymi gospodarkę hormonalną. S. Commune jest jednym z wielu grzybów typu „biało-brązowa zgnilizna” ze zdolnością do rozkładania zanieczyszczeń hormonalnych i hormonalnych zaburzających funkcjonowanie układu hormonalnego. Grzyby te żywią się drzewami, wydalając enzymy „lignocelulozowe” z ich usieciowanych ciał lub „grzybni”, a enzymy te są w stanie rozłożyć celulozę i ligninę, z których zbudowane są drzewa. Ze względu na podobieństwa strukturalne między celulozą, ligniną i EDS / hormonami, takimi jak atrazyna, BPA, estradiol, dietylostilbestrol i nonylofenole, „lignocelulozowe” enzymy wydzielane przez grzyby mogą również rozkładać szeroką gamę toksyn. Ponadto S. Commune wytwarza immunostymulujące polisacharydy, które są pomocne w profilaktyce i leczeniu raka (zatwierdzone w Japonii do leczenia raka szyjki macicy), mogą zwiększać właściwości fitoestrogenne niektórych roślin poprzez fermentację, mogą być stosowane zamiast podpuszczki i pałeczek kwasu mlekowego w procesów serowarskich i wytwarzają enzymy rozpuszczające skrzep trombiny (przydatne w leczeniu zakrzepicy). Co dziwne, te same „beta-glukany”, które można wyekstrahować wrzącą wodą jako leki przeciwnowotworowe i immunostymulanty, są również wykorzystywane przez przemysł naftowy do zwiększania wydajności ropy naftowej, wiążąc S. Commune w bizaarową pętlę sprzężenia zwrotnego z produkcją zaburzających gospodarkę hormonalną petrochemikalia jest zdolna do degradacji i remediacji.

2 ~ Opracuj protokoły DIY i DIWO (zrób to z innymi), które uproszczą te przepisy do pracy z EDC i grzybami, aby przetłumaczyć skodyfikowaną wiedzę naukową na język, który jest bardziej dostępny. Wykorzystaj te przepisy do edukacji, do kwestionowania, do oporu wobec kolonizacji molekularnych i tworzenia nowych narracji o wielogatunkowym stawaniu się i naszej zbiorowej mutagenezie.

3 ~ Zmierz się z dominującym cisheteronormatywnym, queerfobicznym dyskursem wokół substancji chemicznych zaburzających funkcjonowanie układu hormonalnego (EDC). Cytując stypendium Malin Ah-King i Evy Hayward na ten temat: „Wiele mediów informuje o tych przerażających endokrynologicznych opowieściach z naszych podwórek. które zagrażają seksowi i seksualności. Zamiast zajmować się wieloma innymi zagrożeniami dla zdrowia związanymi z narażeniem na toksyny, najbardziej sensacyjne i polemiczne kwestie są przedmiotem debaty i krytycznej odpowiedzi. Rodzi to pytania: dlaczego seks jest ważniejszy niż rak, choroba autoimmunologiczna, a nawet śmierć? Jakie nerwy kulturowe (z których wiele jest zglobalizowanych) są wyzwalane? A dla tych z nas, które mają obawy feministyczne, jak przeorientować debatę z dala od esencjalizmu, seksizmu i heteronormatywności? (Toksyczne płcie).

Schizophyllum Commune to wyjątkowy „grzyb białej zgnilizny”, ponieważ stwierdzono, że ma ponad 28 000 płci genetycznych. Ta adaptacja, jak wielu przypuszcza, umożliwiła niesamowitą różnorodność genetyczną tego gatunku, która istnieje na każdym kontynencie świata z wyjątkiem Antarktydy. Chcieliśmy uczcić piękną seksualną mnogość tego organizmu jako jeden z przykładów dziwaczności biologii. Dominujący dyskurs wokół EDC w mediach, a nawet aktywistów ekologicznych, koncentruje się w dużej mierze na nienaukowych narracjach, że te molekuły powodują pewne seksualności lub płcie, które nasze społeczeństwo patologizuje, określa jako nienormatywne i często dąży do wyeliminowania lub uniknięcia. To nie tylko spanikowany seksem i queer fobią punkt zainteresowania opinii publicznej na temat EDC nierealistyczny z naukowego punktu widzenia (hormony i substancje zaburzające gospodarkę hormonalną nie sprawiają, że ludzie stają się queer ani trans), ale ignoruje wszystkie dewastujące rzeczywiste skutki, które możemy powiązać z EDC: otyłość, zaburzenia tarczycy, niektóre nowotwory i inne zagrożenia dla zdrowia.

Krok 1: Znajdź gminę Schizophyllum żyjącą w Twojej społeczności

Sterylne kultury Schizophyllum Commune klasy laboratoryjnej można kupić za około 350 USD w banku kultur mikrobiologicznych, takim jak ATCC… dlatego zdecydowaliśmy się na hodowlę z dzikich grzybów za darmo:)

Było mi łatwo, bo czytałem o Komunie Schizophyllum i przypadkiem zauważyłem, jak pewnego dnia rośnie na drzewie przed moim mieszkaniem. Jeśli nie masz tyle szczęścia, że przypadkowo natkniesz się na S. Commune w swojej okolicy, będziesz chciał udać się na teren zalesiony, aby poszukać grzybów „nawiasowych” rosnących na chorowitych drzewach liściastych (drzewa, które wyglądają, jakby nie zbyt dobrze) lub zwalone drzewa. S. Commune jest jednym z najczęściej występujących grzybów na świecie i można go znaleźć praktycznie wszędzie, gdzie rośnie drewno liściaste.

Mushroomobserver.org zapewnia bardzo szczegółowy opis tego, gdzie i kiedy można znaleźć S. Commune, a także jak ją zidentyfikować i jak uniknąć „podobieństw”, które mogą prowadzić do błędnej identyfikacji:

IDENTYFIKACJA: Schizophyllum commune można łatwo rozpoznać po rozdwojonych skrzelach, gęstym włosie i wachlarzowatym kapeluszu. Kapelusz ma 1-4,5 cm szerokości i zwykle ma kształt muszli lub wachlarza o szarej do białawej powierzchni. Bazydiospory mają wymiary 5-7,5 × 2 -3 mikrometry Podobny grzyb znany jako „Crimped Gill” Plicaturopsis crispa nie jest tak szeroko rozpowszechniony.

SIEDLISKO: Schizophyllum commune rośnie na twardym drewnie przy użyciu enzymów do degradacji ligniny i powoduje „białą zgniliznę”. Tak więc można go znaleźć w większości obszarów zalesionych. Można go znaleźć przez cały rok ze względu na jego zdolność do wysychania, ponownego nawadniania w lepszych warunkach, a następnie dalszego zarodnikowania.

Ten grzyb może pasożytować na drzewach o małej średnicy, które są narażone na inne czynniki, takie jak susza.

WYGLĄDA PODOBNIE: Plicaturopsis crispa lub „Crimped Gill” jest podobny do Split Gill. Ma również owocnik w kształcie muszli / wachlarza. Jednak czapka jest czerwonawo-brązowa lub żółto-brązowa, a spód jest bardzo charakterystyczny. Ma pofałdowane żyły jak skrzela, które znacznie różnią się od rozszczepionych skrzeli gminy Schizophyllum. Zaciśnięte blaszki są mniej powszechne, ale charakterystyczne, gdy zostaną znalezione.

Krok 2: Przygotuj płytki z agarem odżywczym, aby S. Commune mogła dalej rosnąć

Aby wyizolować kulturę S. Commune, będziesz potrzebować szalek Petriego wypełnionych pożywieniem dla grzyba. Agar z ekstraktem słodowym jest prostym w przygotowaniu pokarmem dla S. Commune lub „pożywką”, którą można przygotować z łatwo dostępnych składników. Jest to również dobre źródło pożywienia do wykorzystania podczas eksperymentów z testami enzymatycznymi z S. Commune i innymi grzybami powodującymi białą lub brązową zgniliznę. Proces ten zostanie omówiony w innej instrukcji.

UWAGA: Jeśli miałeś problem ze znalezieniem S. Commune, istnieje wiele innych grzybów z tej samej rodziny, które można hodować przy użyciu tych samych procesów i równie dobrze, jeśli nie lepiej, degradują zanieczyszczenia zaburzające gospodarkę hormonalną. Ogon indyka (Trametes Versicolor) został znaleziony w wielu badaniach, które dotyczyły setek białych i brązowych grzybów zgnilizny jako największych producentów „lignocelulozowych” enzymów, które degradują zanieczyszczenia petrochemiczne. Boczniaki też są w tym bardzo dobre.

Swoją pracę mikrobiologiczną wykonuję w lokalnym laboratorium biologicznym o nazwie BUGSS (Baltimore Underground Science Space), gdzie mam dostęp do szkła, wag cyfrowych, cylindrów z podziałką, autoklawu (do sterylizacji mediów pod wpływem ciepła i ciśnienia) itp. pojawiły się na całym świecie w ciągu ostatniej dekady, więc warto sprawdzić tę listę, aby sprawdzić, czy jest w pobliżu. Jeśli nie masz takiego świetnego laboratorium społecznościowego w swojej okolicy, będziesz musiał zainwestować w podstawowy sprzęt do tego procesu, taki jak:

1 ~ Cyfrowa waga do precyzyjnego odmierzania składników

2 ~ Szybkowar do sterylizacji mediów ciepłem i parą

3 ~ szalki Petriego, można je dość tanio kupić online, szkło wielokrotnego użytku lub jednorazowe plastikowe będą działać, ale ponowne użycie jest zawsze lepsze:)

4 ~ Niektóre naczynia szklane do mieszania składników, sterylizacji i przechowywania.

Jeśli nie chcesz inwestować w ten sprzęt, możesz znaleźć wstępnie wylane płytki agarowe z ekstraktem słodowym do kupienia na stronach internetowych takich jak Amazon ~ na dłuższą metę będzie to po prostu droższe, jeśli planujesz kontynuować pracę mikrobiologiczną.

Istnieje już wiele świetnych przewodników i filmów na youtube o tym, jak zrobić w domu własne szalki Petriego z pożywkami. Więc zamiast zagłębiać się w szczegóły, podam link do kilku – i podam przepis na 2% agar z ekstraktem słodowym, który jest pożywką, której będziesz używać.

Grzyby Freshcap: Przewodnik po tym, jak zrobić płytki agarowe do uprawy grzybów w domu

Mykoweb: Pierwsze kroki w uprawie grzybów

Karta danych technicznych agaru z ekstraktem słodowym

2% agar z ekstraktem słodowym (MEA) ~~ Przepis na 1 litr:

20g ekstraktu słodowego (powszechny zapas do produkcji piwa, można kupić online)

15g Agar (środek zestalający - często używa się go do gotowania, więc można go kupić online lub w niektórych sklepach spożywczych)

1 litr H20 (zwykle używam wody odwróconej osmozy, którą można kupić w większości sklepów spożywczych w dzbankach galonowych)

Ten przepis można łatwo zmodyfikować, jeśli chcesz zrobić mniejsze ilości. Na przykład, często robię jednorazowo tylko 250 ml, więc używam tylko 5 gramów ekstraktu słodowego, 3,75 gramów agaru i 250 ml wody.

Krok 3: Zaszczep swoją szalkę Petriego grzybami

Grzyb, który widzisz, nazywa się „owocnikiem”, to tylko niewielka część organizmu. Większość jego ciała jest ukryta w drzewie (lub w ziemi), zużywając drewno. Ta część grzyba nazywana jest grzybnią. Aby wyhodować białe nitkowate, mackowate, kłączowe, grzybniowe ciało Schizophyllum Commune na szalce Petriego, pobierze się próbkę łodygi, wysterylizuje i umieści na płytkach MEA. Grzybnia wyrośnie z wysterylizowanej próbki rdzenia łodygi grzyba i skolonizuje szalkę Petriego, wyglądając jak biała, bawełniana mata.

Będziesz potrzebował:

• Płytki z agarem z ekstraktem słodowym (MEA) przygotowane w poprzednim kroku
• 70% alkohol izopropylowy (alkohol do nacierania) i butelka ze spryskiwaczem
• Ręczniki papierowe
• Skalpel, czyli po prostu brzytwa ze stali nierdzewnej – sprawdzi się nóż do pudełek
• metalowe pęsety
• rękawiczki
• Płomień - używam lampy alkoholowej do sterylizacji narzędzi, NonDisjunction ma świetny samouczek, jak to zrobić.
• Sterylna powierzchnia do cięcia (użyłem do tego sterylnej szalki Petriego)
• Parafilm, folia parafinowa używana do uszczelniania szalek Petriego – możesz również użyć taśmy maskującej, jeśli jej nie masz

TECHNIKA STERYLNA:

Najważniejszą rzeczą, o której należy pamiętać, próbując zastosować sterylną technikę, jest to, że bakterie i zarodniki stale unoszą się w powietrzu, więc należy jak najbardziej przykryć szalki Petriego. Kiedy podniesiesz pokrywki, aby nalać pożywkę lub zaszczepić, zawsze najlepiej jest trzymać pokrywkę tuż nad naczyniem, umożliwiając dostęp do środka poziomo, ale utrzymując pokrywkę nad naczyniem, aby zapobiec wpadaniu bakterii. Po drugie, ty to gigantyczny konglomerat ludzkich, bakteryjnych, grzybiczych i innych organizmów – chociaż nie możesz tego zobaczyć, otacza cię gęsta chmura drobnoustrojów, które dyfundują z twojego ciała. Zamiast po prostu siedzieć na powierzchni skóry, twój mikrobiom rozciąga się w powietrze ~~ baaardzo, nigdy nie machaj rękami nad szalką Petriego ani nie pochylaj się nad otwartą szalką, aby zajrzeć do środka. I noś rękawiczki, jeśli Masz ich;)

SKONFIGURUJ PÓŁSTERYLNE MIEJSCE PRACY

Wybierz nieporowatą powierzchnię roboczą, wolną od zanieczyszczeń i śmieci. Spryskaj obszar 70% roztworem alkoholu izopropylowego i wytrzyj go ręcznikiem papierowym. Umieść swój płomień na środku swojego miejsca pracy i zapal go. Będziesz chciał pracować jak najbliżej płomienia, ponieważ tworzy wokół niego małe sterylne pole. Umieść płytki MEA z jednej strony, a próbkę grzybów na sterylnej powierzchni do cięcia z drugiej strony. Zwykle używam sterylnej szalki Petriego jako sterylnej powierzchni tnącej, a także podpórki na narzędzia. Wlej trochę alkoholu izopropylowego do małej szklanki - użyjesz tego do wysterylizowania ostrza i pęsety podczas pracy.

*¡~ Zaszczepić ~!*

Zanim cokolwiek zrobisz, wysterylizuj ostrze i pęsety, zanurzając je w wywaru izopropylowym, a następnie trzymając je przez chwilę nad płomieniem. Po sterylizacji połóż je na sterylnej powierzchni do cięcia, jeśli je odłożysz. Używając pęsety, przytrzymaj łodygę grzyba nieruchomo i odetnij kawałek od jej końca. Weź ten kawałek i pokrój wszystkie boki, aby otrzymać małą kostkę rdzenia łodygi grzyba z usuniętymi wszystkimi zewnętrznymi powierzchniami. Pomaga to pozbyć się wszystkich innych drobnoustrojów żyjących na grzybie, aby nie zanieczyścić kultury. Następnie zanurz rdzeń łodygi w izopropylu na około 30 sekund, wyciągnij i pozostaw do wyschnięcia w sterylnym polu płomienia (nie używaj płomienia do suszenia, to zabije grzyba). Ponownie wysterylizuj pęsetę płomieniem, czekając na wyschnięcie rdzenia łodygi. Następnie po prostu podnieś pokrywkę jednej z płytek MEA na tyle, aby wsunąć pęsety z boku i użyj wysterylizowanej pęsety, aby umieścić rdzeń trzpienia na środku płytki. Uszczelnij płytkę parafilmem iw ciągu następnych kilku tygodni powinieneś zobaczyć, jak grzybnia S. Commune kolonizuje płytkę.

Zwykle robię kilka płytek podczas pracy z dzikimi próbkami, więc jeśli dostanę skażenie, jest bardziej prawdopodobne, że będę miał co najmniej jedną czystą kulturę.